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La sélection d'hybridomes après la fusion des myélomes et des cellules de rate est une étape critique dans la production d'anticorps monoclonaux. Souvent, les chercheurs utilisent la méthode HAT (hypoxanthine-aminoptérine-thymidine) pour accomplir cette tâche. 

Lors de ce processus de fusion, trois types de cellules sont présents : (1) des cellules de myélome non fusionnées à qui il manque l'enzyme appelée HGPRT, (2) des cellules de rate non fusionnées et (3) des cellules d'hybridome fusionnées.

  • Les cellules de rate non fusionnées sont facilement sélectionnées car elles ne se répliquent pas en culture.
     
  • Les myélomes non fusionnés peuvent être sélectionnés en utilisant des milieux contenant de la HAT. L'aminoptérine présente dans le milieu inhibe la voie de synthèse des nucléotides d'ADN de novo. Généralement, lorsque la voie de novo est inhibée, les cellules utilisent la voie sauvage comme autre moyen de  se répliquer (uniquement en cas de présence d'hypoxanthine et de thymidine) Cependant, ces myélomes sont dans l'incapacité de le faire car il leur manque une enzyme appelée HGPRT, nécessaire à la voie sauvage. Ainsi, les myélomes sont incapables de se répliquer en culture.    
     
  • Seuls les hybridomes survivent. Les hybridomes héritent d'une enzyme HGPRT opérationnelle des cellules de la rate, donc même si la voie de novo est inhibée, ils peuvent tout de même utiliser la voie sauvage pour se répliquer.

 

Veuillez regarder notre vidéo d'apprentissage pour plus de détails. 

 

Pour plus d'informations, veuillez télécharger notre eBook, « Sélectionnez les lignées cellulaires de grande valeur de manière professionnelle ».

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